A型禽流感病毒通用型核酸检测标准样品的研制及不确定度分析

利用基因克隆和体外转录技术,制备A型禽流感病毒通用核酸检测阳性标准样品。根据禽流感基质蛋白基因M的序列,设计全长开放阅读框的克隆引物,RT-PCR获得相应片段,连接至pGEM-T载体,测序后采用体外转录方法制备RNA纯品,初步定量稀释后,混合分装作为核酸标准样品候选物。采用实时荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验,并委托外部实验室采用外标实时定量RT-PCR方法对转录的RNA片段进行定值。通过绘制荧光定量标准扩增曲线和协作标定的方式,计算标准物质含量（拷贝）,并进行不确定度的估算。均一性结果显示瓶间差异小于5%,稳定性试验表明室温20~25℃（相对湿度20%~50%）14d,2~8℃3个月以及-20℃保存1年的含量均无明显变化。核酸标准物质定值为（3.120±0.345）×10^8拷贝数,可用作禽流感病毒通用核酸检测的标准质控品。     

应用分子生物学方法快速检测番茄溃疡病菌的研究

根据番茄溃疡病菌的tomA基因序列,设计并合成了特异性PCR检测引物,对番茄溃疡病菌和非番茄溃疡病菌的标准菌株进行了PCR扩增反应。结果,番茄溃疡病菌的PCR产物出现301bp的特异性扩增条带,而非番茄溃疡病菌均未出现扩增条带,证明这对引物具有番茄溃疡病菌鉴定特异性。将分离的番茄溃疡病菌做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度。结果表明,此体系可检出106CFU/mL番茄溃疡病菌菌液提取的模板。     

南芥菜花叶病毒分子生物学快速检测方法的研究

根据南芥菜花叶病毒(Arabis mosaic Nepovirus)CP基因序列,设计并合成了特异性RT-PCR检测引物,对南芥菜花叶病毒和非南芥菜花叶病毒的感病植物组织进行了PCR扩增反应。结果,南芥菜花叶病毒的感病植物组织的PCR产物均出现364bp的特异性扩增条带,而非南芥菜花叶病毒均未出现扩增条带,证明这对引物具有南芥菜花叶病毒鉴定特异性。将提取的南芥菜花叶病毒总RNA做梯度稀释,测定该检测体系的敏感度,结果表明,此体系最低可检出南芥菜花叶病毒提取的RNA模板浓度为150pg/μL。     

蒲公英和车前草在山东境内的春季物候特征及对气候变化的响应

基于2000-2015年山东省对蒲公英和车前草物候及气象观测资料,利用正交经验函数、相关分析、偏最小二乘回归研究了蒲公英及车前草在山东境内的春季物候变化特征及其对气候变化的响应规律。结果表明：1）2000-2015年蒲公英与车前草春季萌动与展叶总体表现为推迟的趋势且半岛沿海站点表现更明显,开花始期的年际变化具有局地性。2）冬季平均气温、2月平均气温升高会极显著促进两种植物的萌动、展叶。1月累积降水量与两种植物的萌动、展叶、开花始期总体显著负相关。鲁东地区两种草本植物的萌动、展叶与冬季日照时长显著负相关。在开花始期,除了冬季热量累积之外,从鲁东到鲁西3月平均气温及活动积温的影响逐渐加强,车前草表现更为明显。3）蒲公英与车前草偏最小二乘物候回归模型拟合结果表明,在萌动、展叶始期,2月平均气温、冬季平均气温、冬季0 cm平均地表温度、冬季正积温VIP值均大于1。在开花始期, 3月平均气温、3月活动积温、冬季平均气温、冬季0 cm平均地表温度在所有地区VIP值均大于1。     

昆虫滞育诱导的光周期反应类型

介绍了昆虫滞育诱导的4种光周期反应类型，即：长日照反应型、短日照反应型、短日照一长日照反应型与中间型日长反应型。根据这4种光周期反应类型显示的结果，光周期反应可能是温度补偿或温度敏感的；基于数量的时间测量或基于质量的时间测量的；极短日照或极长日照对滞育诱导的影响是不同的；诱导夏季滞育的长日照和诱导冬季滞育的短日照对滞育诱导效果是不同的。     

纳升级反相液相色谱-串联质谱法分析麦氏弧菌蛋白质组

[目的]较系统地研究分析麦氏弧菌提取蛋白质.[方法]利用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和纳升级反相液相色谱-串联质谱(nano-RPLC-MS/MS)法系统分析了来源于美国龙虾的一株麦氏弧菌F5-1提取总蛋白和总蛋白直接酶解产物,并进行数据库检索鉴定蛋白质.纳升级反相液相色谱分析条件为:上样量为5ul,经C18预柱(200 μm ×0.5 mm,3μmn,120 A)脱盐10 min,再经过ChromXPC18-CL毛细管柱(75 μm×15 cm,3μ,m,120 A)分析,2％乙腈(0.1％甲酸)-98％乙腈(0.1％甲酸)梯度洗脱90 min,采用ESI-Q-TOF MS,在IDA采集模式下分析鉴定麦氏弧菌提取总蛋白酶解产物.[结果]直接酶解鉴定到1 538种蛋白质,通过Gene Ontolo-gy分析了麦氏弧菌F5-1提取总蛋白的分子功能、生物进程和细胞组分.提取的麦氏弧菌蛋白具有催化、结合、结构分子、转录调节因子等功能活性,其中催化活性的蛋白比例较大,且多为参与代谢进程的相关酶类.[结论]研究可为麦氏弧菌蛋白质组学的深入研究奠定基础.     

焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分GlymBd 30K基因

[目的]建立一种通过焦磷酸测序技术检测大豆过敏原成分的方法。[方法]针对大豆Glym Bd30K基因设计特异性PCR引物和焦磷酸测序引物,利用设计的特异性引物扩增各测试材料的特异基因片段并进行焦磷酸测序。[结果]该检测方法对大豆过敏原成分具有非常好的重现性和特异性,测序结果在Gen Bank中进行同源性比对分析,表明目标序列能够作为鉴定Glym Bd 30K基因很好的序列。[结论]为食品中的大豆过敏原成分快速检测提供很好的技术支撑。     

对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的流行病学与检测技术研究进展

对虾传染性皮下及造血组织坏死病(IHHN)是国际兽疫局(OIE)划定的甲壳类其他重要疾病之一，它分布广泛，危害严重，对世界对虾养殖业的发展影响重大。随着国际贸易的不断发展，区域间个体的流动有可能造成该病病毒传播。有迹象表明，近几年来中国养殖对虾中已发现IHHNV，且呈流行趋势。目前，国际上已建立起多种标准检测方法以监控疾病的流行。本文就该病毒的病毒特性、感染宿主、传播途径、地理分布及诊断技术等方面的研究现状作一综述，旨为对虾病毒性流行病学调查及疾病监控提供参考。     

马动脉炎病毒血凝抑制试验与微量中和试验的对比研究

195 5年在美国俄亥俄州 Bucyrus地区某牧场的马群暴发急性马病毒性动脉炎 ,主要发生于妊娠母马并引起流产 ,其特征性病理变化为病变器官小动脉膜变性和坏死 [1]。随后 Doll等从流产的胎儿组织中分离出病毒 ,并命名为马动脉炎病毒 (EquineViral Arteritis,EAV) ,后该分离株 (Bucyrus株 )被称为马动脉炎病毒的原型病毒。目前 ,从血清学调查来看 ,该病分布于世界各国 ,严重影响养马业的发展 ,甚至造成严重的经济损失 [2～ 4 ]。马动脉炎病毒是一种有囊膜的负链 RNA病毒 ,在分类上与猪繁殖与呼吸综合征病毒 (Porcine Reproductive andResp…     

入世后中国花生产业发展前景及促进出口的对策

通过对入世后我国花生产业有关问题的分析,利用国内外市场价格、产量、出口量等数据比较,提出发展花生生产对满足国内油料供应,减少油料进口,防范转基因产品风险,增加农民收入,解决农村劳动力剩余和促进西部开发等问题的重大意义,指出花生是入世后我国参与国际竞争的重要产业.同时从花生品种、食品安全卫生、加工和贸易方面分析了入世后制约花生生产尤其是出口花生生产中存在的主要问题,并提出了解决问题的对策和建议,对指导我国花生产业的发展具有指导意义.